pb實驗心得體會實用 pbl的心得體會(7篇)

當(dāng)在某些事情上我們有很深的體會時，就很有必要寫一篇心得體會，通過寫心得體會，可以幫助我們總結(jié)積累經(jīng)驗。優(yōu)質(zhì)的心得體會該怎么樣去寫呢？下面我給大家整理了一些心得體會范文，希望能夠幫助到大家。

最新pb實驗心得體會實用一

1、取96孔90°v形酶標(biāo)板，用微量移液器在第一至第五排的1~12孔每孔加25 μl pbs液。

2、吸取25 μl標(biāo)準(zhǔn)禽流感抗原加入到第一排第1孔中充分混勻。

3、從第1孔吸取25 μl混勻后的抗原液加到第2孔中，混勻后吸取25μl加入到第3孔中，依次進(jìn)行倍比稀釋至第二排最后一孔即第24孔，最后棄去25 μl。第三排孔至第四排孔同上操作。

4、依次向第一至第五排孔的每孔中加入25 μl 1%的雞紅細(xì)胞懸液。

5、將酶標(biāo)板置于微量振蕩器上振蕩10秒，室溫（20-25℃）靜置30 min觀察結(jié)果（如果環(huán)境溫度太高，可置4℃環(huán)境下）。

6、結(jié)果判定：將板作45°傾斜，觀察紅細(xì)胞是否呈淚滴狀流淌。以完全凝集（不流淌）的抗原或病毒最高稀釋倍數(shù)為1個血凝單位（hau）

1、根據(jù)血凝試驗結(jié)果配制4hau抗原。（即1hau抗原除以4）

2、取96孔v形酶標(biāo)板，用移液器在第1~12孔各加入25 μl pbs。

3、在第1孔加入25 μl被檢血清，充分混勻后移出25 μl加至第2孔，依次類推，倍比稀釋至第12孔，棄去25 μl。

4、按以上步驟加入陽性血清和陰性血清（各做兩份），作對照孔。

5、在第1~12孔各加入25 μl 4單位抗原，置于微量振蕩器上輕輕混勻，室溫20-25℃下靜置30 min。

6、每孔加入25 μl 1%的雞紅細(xì)胞懸液。置于微量振蕩器上輕輕混勻，室溫（20-25℃）靜置40 min后觀察結(jié)果，若環(huán)境溫度過高，可于4℃條件下進(jìn)行，紅細(xì)胞將呈明顯的紐扣狀沉到孔底。

7、結(jié)果判定：只有陰性對照孔血清滴度不大于2 log2，陽性對照孔誤差不超過1個滴度，試驗結(jié)果才有效。 將酶標(biāo)板作45°傾斜，以完全抑制紅細(xì)胞凝集的最大稀釋倍數(shù)判為該血清的血凝抑制滴度。當(dāng)被檢血清效價大于等于4log2，判為禽流感抗體陽性。

1樣品的保存及試驗前處理

1.1 采集的血液樣品應(yīng)及時分離血清，最好分裝至離心管中，標(biāo)記清楚，離心后吸出血清，對應(yīng)編號冷藏送檢，并禁止運輸過程中劇烈震動。

1.2 一般情況下，在5天內(nèi)檢測的樣品可放置在4℃的冰箱中冷藏，否則低溫冷凍保存。

1.3 在檢測前血清樣品應(yīng)充分混勻，混勻時采用上下緩慢顛倒幾次的方法即可，切忌劇烈振蕩而引起產(chǎn)生氣泡及血清中蛋白變性。

1.4 對出現(xiàn)膠凍狀的血清樣品，可采用反復(fù)攪動幾下再離心的方法有助于緩解該狀態(tài)。膠狀物是含纖維蛋白和纖維蛋白原的血清，可能是由于放置時間不夠造成的血清未完全析出狀態(tài)。不建議直接吸取其中少量的清亮血清。

1.5 水禽等樣品為排除非特異性反應(yīng)，還應(yīng)相應(yīng)進(jìn)行滅能反應(yīng)。具體操作方法：56℃水浴鍋30min或加等量10%雞紅細(xì)胞，輕搖后靜置30分鐘，離心，收集上清液即可。

2器材的選擇

2.1 酶標(biāo)板的選擇：

建議使用96孔90°v型板進(jìn)行試驗，通過反復(fù)試驗證明：90°v型板相對于110°板及130°板來講，具有紅細(xì)胞沉降速度快，產(chǎn)生的凝集圖像清晰、結(jié)果容易判定等優(yōu)點。

2.2 移液槍的選擇及使用：

①單道、多道可調(diào)微量移液槍應(yīng)選擇合適的量程，以便精確度的提高。

②使用時應(yīng)采用一檔吸液二檔排液的方法。吸取液體時，槍頭要深入液下緩慢平穩(wěn)吸液。加緩沖液時

應(yīng)加在板孔底部。倍比稀釋血清時，應(yīng)每孔至少反復(fù)吹吸6次，以便混合均勻，還應(yīng)注意盡量避免產(chǎn)生泡沫引起混合不均。加抗原及紅細(xì)胞時應(yīng)在板內(nèi)液面上方加樣，以免交叉污染，影響試驗結(jié)果。

③加樣、倍比稀釋時應(yīng)高度集中注意力，以免漏加、重復(fù)加樣等。

3試劑的保存及配置

3.1 禽流感血凝抑制試驗所用的抗原、陽性血清應(yīng)嚴(yán)格按照說明書的要求進(jìn)行保存和配置，試驗前應(yīng)提前將其恢復(fù)至室內(nèi)溫?？乖谋４鏈囟葹?20℃，反復(fù)凍融會降低抗原的滴度，應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3.2 ph7.2、0.01mol/l的pbs液的制備

①應(yīng)盡量現(xiàn)用現(xiàn)配

②每次使用前應(yīng)測ph值，以免時間過長而導(dǎo)致ph值發(fā)生改變。

③由于ph試紙跨度范圍偏大，ph值不易準(zhǔn)確介定，因此最好采用酸度計準(zhǔn)確測量ph值，以提高試驗的精確度。

④全部試驗均采用同一種稀釋液。

3.3 1%紅細(xì)胞的制備

①為避免有些雞只的紅細(xì)胞有自凝現(xiàn)象，因此配制1%紅細(xì)胞懸液時應(yīng)最好選擇采取2-3只spf雞或未進(jìn)行過任何免疫過的成年公雞血液。當(dāng)然采血的前提條件是要按十分之一采血量比例在一次性注射器中加入抗凝劑，如肝素、枸椽酸鈉、檸檬酸鈉等。

②采血完畢后最好分裝至2ml容量的圓底離心管中，因為通過2ml與1.5ml兩種容量離心管相比較，放入1.5ml尖底離心管中的話，離心后，離心管底部紅細(xì)胞不易與加入的pbs液混勻，易沉積在管底部，達(dá)不到洗脫干凈的目的。

③經(jīng)20xx~3000r/min，5~10min，棄去上液和紅細(xì)胞上層的白細(xì)胞薄膜，再加入十倍以上血量的pbs液，上下緩慢顛倒（切忌用力過大使紅細(xì)胞破裂），使其充分混勻，再離心棄去上清液，反復(fù)幾次直至上清液清亮透明為止。

④在加紅細(xì)胞過程中還須不斷輕搖以確保紅細(xì)胞均勻，使其每孔加入相同數(shù)量的紅細(xì)胞。

⑤制備好的紅細(xì)胞液如果放置后上清液變紅，說明有溶血，不可再使用。

3.4抗原液的配制

①先做血凝試驗測定效價，以抗原與紅細(xì)胞完全凝集的孔為1hua抗原，配制4hua抗原應(yīng)往前推算兩孔，即除以4后的值。

②每次做試驗前，必須重新檢測禽流感抗原的血凝效價，以免效價發(fā)生改變而導(dǎo)致抗原稀釋倍數(shù)不準(zhǔn)確，從而導(dǎo)致試驗結(jié)果不準(zhǔn)確。

③為保證配制的抗原準(zhǔn)確，還要進(jìn)行抗原回滴試驗。具體方法：做二排抗原回滴，在兩排的第1~8孔各加25微升pbs，取4hau抗原25微升加在兩排的第1、第2孔，混勻，從第2孔倍比稀釋至第4孔，棄去25微升，另一排同樣。從第2至第8孔補25微升pbs，以保持75微升總量不變，另一排同樣。兩排的第1至第8孔各加25微升1%紅細(xì)胞，震蕩10秒鐘。靜置30分鐘觀察結(jié)果。這樣在第1孔為4hau抗原，第2孔為2hau抗原，第3孔為1hau抗原，第4孔為1/2hau抗原，均為75微升總量，第5至第8孔為空白對照。如果抗原回滴試驗不成立，應(yīng)相應(yīng)調(diào)整抗原濃度直至回滴試驗成立。因為如果抗原濃度過高，則所測定的抗體效價水平偏低，如果抗原濃度過低，則所測定的效價偏高。所以不調(diào)整抗原濃度至實驗成立的話會對結(jié)果有很大影響。

4結(jié)果的判定

每次試驗必須設(shè)陽性及陰性（空白）對照血清，判別試驗是否成立。判讀結(jié)果時，將酶標(biāo)板傾斜45°，以孔底沉淀的紅細(xì)胞流動性好，呈淚珠樣流淌，邊緣無凝集顆粒為凝集完全抑制。

5試驗器具的清洗

每次試驗完畢后，應(yīng)將酶標(biāo)板中液體甩凈，然后用自來水反復(fù)沖凈每個孔，再放入3%naoh中4小時，清水反復(fù)沖凈，再放入3%hcl中4小時，清水反復(fù)沖凈，再用蒸餾水反復(fù)沖洗幾次，甩干水份，入干燥箱中干燥備用。實驗用燒杯、加樣槽、量筒等也應(yīng)充分洗凈、干燥。以免器具內(nèi)有雜物、污物以及殘留物從而影響試驗結(jié)果。

在進(jìn)行禽流感血凝抑制試驗時，應(yīng)充分考慮到各方面的影響因素，提供的檢測結(jié)果才會真實可靠，準(zhǔn)確掌握禽類的免疫抗體水平，進(jìn)而為科學(xué)防控禽流感提供理論依據(jù)。

最新pb實驗心得體會實用二

1、掌握顯示細(xì)胞中過氧化物酶反應(yīng)的原理和方法。2.了解細(xì)胞凋亡的生物學(xué)意義

3、掌握凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)檢測方法

1、細(xì)胞內(nèi)的過氧化物酶能把許多胺類氧化為有色化合物，用聯(lián)苯胺處理標(biāo)本，細(xì)胞內(nèi)的過氧化物酶能把聯(lián)苯胺氧化為藍(lán)色的聯(lián)苯胺藍(lán)，進(jìn)而變?yōu)樽厣a(chǎn)物，因而可以根據(jù)顏色反應(yīng)來判定過氧化物酶的有無或多少。中間產(chǎn)物藍(lán)色聯(lián)苯胺是不穩(wěn)定的，無需酶的參加即可氧化為棕色化合物。

2、細(xì)胞凋亡是指細(xì)胞在生理或病理條件下，遵循自身的程序，自己結(jié)束其生命的過程。它是一個主動的、高度有序的，基因控制的，一系列酶參與的過程。

3、凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征是:體積變小,細(xì)胞質(zhì)濃縮;細(xì)胞核發(fā)生染色質(zhì)凝聚和聚集于核膜周圍(邊緣化);細(xì)胞膜有小泡狀形成;晚期細(xì)胞膜內(nèi)陷形成大小不同的凋亡小體;根據(jù)細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行顯微觀察是檢測細(xì)胞凋亡的一種直觀、可靠的方法。

細(xì)胞中過氧化物酶的顯示

1、在載片上滴一滴pbs緩沖液；

2、取骨髓細(xì)胞：用斷頸法處死小鼠，立即剪取后肢，去除肌肉，剝出后肢股骨，剪開股骨一端，用牙簽尖的一端插入剪開的小孔中，摳取少許骨髓細(xì)胞置滴有pbs的載片上；

3、涂片：用另一玻片將骨髓細(xì)胞沿一個方向涂布推開，室溫晾干；

4、媒染：在涂片上滴0.5％硫酸銅液，以蓋滿涂片為宜，處理30秒-1分鐘。5、傾去硫酸銅液，直接滴入聯(lián)苯胺混合液反應(yīng)6分鐘（以蓋滿涂片為宜）6、清水沖洗，番紅復(fù)染2min。

7、鏡檢：清水沖洗，室溫晾干，先低倍鏡下觀察，后換高倍鏡下觀察（油鏡100×）

細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測與觀察吉姆薩染色:

1、取細(xì)胞爬片置于小培養(yǎng)皿中(有細(xì)胞面朝上)2、生理鹽水輕輕漂洗細(xì)胞3、95%乙醇固定5min

4、pbs緩沖液洗2次

5、吉姆薩染色液染色5min6、蒸餾水輕輕洗去染液

7、普通光學(xué)顯微鏡下觀察。吖啶橙染色:

1、取細(xì)胞爬片置于小培養(yǎng)皿中(有細(xì)胞面朝上)2、生理鹽水輕輕漂洗細(xì)胞

3、甲醇：冰醋酸（3：1）固定5min4、pbs緩沖液洗2次每次1min

5、0.01%吖啶橙染色液在避光環(huán)境下染色5min6、蒸餾水輕輕洗去染液

6、選用藍(lán)光激發(fā)濾片在熒光顯微鏡下觀察。

1、根據(jù)隨機(jī)選擇的幾個視野的統(tǒng)計，該樣品的細(xì)胞凋亡率=227/506×100=44.9

hela細(xì)胞凋亡過程中核染色質(zhì)的形態(tài)變化（吖啶橙染色）

1、細(xì)胞凋亡的調(diào)控機(jī)制

細(xì)胞凋亡是一個受基因調(diào)控、眾多細(xì)胞膜受體和胞漿蛋白參與的細(xì)胞主動自殺過程，其觸發(fā)因素多種多樣，包括細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)因子和抑制因子對細(xì)胞凋亡的調(diào)控。

2、細(xì)胞凋亡的特征

凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征是:體積變小,細(xì)胞質(zhì)濃縮;細(xì)胞核發(fā)生染色質(zhì)凝聚和聚集于核膜周圍(邊緣化);細(xì)胞膜有小泡狀形成;晚期細(xì)胞膜內(nèi)陷形成大小不同的凋亡小體。

3、研究細(xì)胞凋亡的方法

定性的研究方法：常規(guī)瓊脂糖凝膠電泳、脈沖場倒轉(zhuǎn)瓊脂糖凝膠電泳、形態(tài)學(xué)觀察（普通光學(xué)顯微鏡、透射電鏡、熒光顯微鏡）

定量或半定量的研究方法：各種流式細(xì)胞儀方法、原位末端標(biāo)記法、elisa定量瓊脂糖凝膠電泳。

最新pb實驗心得體會實用三

實驗?zāi)康模阂娊滩?。實驗儀器見教材。

實驗結(jié)果及數(shù)據(jù)處理：例：（一）低碳鋼試件

強(qiáng)度指標(biāo)：

ps=xx22.1xxxkn屈服應(yīng)力ζs= ps/a xx273.8xxxmpa p b =xx33.2xxxkn強(qiáng)度極限ζb= pb /a xx411.3xxxmpa

塑性指標(biāo)：伸長率l1—ll100%aa1a33.24 %

面積收縮率100%

68.40 %

低碳鋼拉伸圖：

（二）鑄鐵試件

強(qiáng)度指標(biāo)：

最大載荷pb =xx14.4xxx kn

強(qiáng)度極限ζb= pb / a = x177.7xx m pa

問題討論：

1、為何在拉伸試驗中必須采用標(biāo)準(zhǔn)試件或比例試件，材料相同而長短不同的試件延伸率是否相同？

答：拉伸實驗中延伸率的大小與材料有關(guān)，同時與試件的標(biāo)距長度有關(guān)。試件局部變形較大的斷口部分，在不同長度的標(biāo)距中所占比例也不同。因此拉伸試驗中必須采用標(biāo)準(zhǔn)試件或比例試件，這樣其有關(guān)性質(zhì)才具可比性。

材料相同而長短不同的試件通常情況下延伸率是不同的（橫截面面積與長度存在某種特殊比例關(guān)系除外）。

2、分析比較兩種材料在拉伸時的力學(xué)性能及斷口特征。

答：試件在拉伸時鑄鐵延伸率小表現(xiàn)為脆性，低碳鋼延伸率大表現(xiàn)為塑性；低碳鋼具有屈服現(xiàn)象，鑄鐵無。低碳鋼斷口為直徑縮小的杯錐狀，且有450的剪切唇，斷口組織為暗灰色纖維狀組織。鑄鐵斷口為橫斷面，為閃光的結(jié)晶狀組織。

教師簽字：x xxxxxxx

日期：xxx xxxxx

實驗?zāi)康模阂娊滩摹嶒炘恚阂娊滩摹?/p>

實驗數(shù)據(jù)記錄及處理：例：（一）試驗記錄及計算結(jié)果

問題討論：

分析鑄鐵試件壓縮破壞的原因。

答：鑄鐵試件壓縮破壞，其斷口與軸線成45°~50°夾角，在斷口位置剪應(yīng)力已達(dá)到其抵抗的最大極限值，抗剪先于抗壓達(dá)到極限，因而發(fā)生斜面剪切破壞。

最新pb實驗心得體會實用四

(1)加深對弱電解質(zhì)的解離平衡、同離子效應(yīng)、鹽類水解等基本概念的理解。了解緩沖溶液的緩沖作用及配制。

(2)掌握難溶電解質(zhì)的多相離子平衡及沉淀的生成和溶解的條件。

在弱電解質(zhì)的解離平衡或難溶電解質(zhì)的沉淀一溶解平衡體系中，加入與弱電解質(zhì)或難溶

電解質(zhì)具有相同離子的易溶強(qiáng)電解質(zhì)，則平衡向左移動，產(chǎn)生使弱電解質(zhì)的解離度或難溶電解質(zhì)的溶解度明顯降低的現(xiàn)象，叫做同離子效應(yīng)。

試管、藥匙、氨水、醋酸銨固體、酚酞。甲基橙、碘化鉛。碘化鉀。

(l)在小試管中加入1 cm3 0.l mol·dm-3 nh3水溶液和1滴酚酞指示劑，

觀察溶液顏色。再加入少許nh4ac晶體，振蕩使其溶解，觀察溶液顏色的變化并進(jìn)行解釋(2)自己設(shè)計一實驗，驗證同離子效應(yīng)使hac溶液中的h+濃度降低。

(3)在試管中加入3滴pbi2飽和溶液，加入2滴0.l mol·dm-3 ki溶液。觀察現(xiàn)象，解釋之。

(l)在小試管中加入1 cm3 0.l mol·dm-3 nh3水溶液和1滴酚酞指示劑，觀察溶液顏色。再加入少許

nh4ac晶體，振蕩使其溶解，因同離子效應(yīng)oh-濃度降低，堿性降低，紅色溶液

顏色變淺或褪去，

(2)自己設(shè)計一實驗，驗證同離子效應(yīng)使hac溶液中的h+濃度降低。在小試管中用滴管加入1毫升0.1摩爾/升醋酸水溶液和1滴甲基橙指示劑，因醋酸溶液呈酸性，使甲基橙

溶液有無色變?yōu)榧t色。再用藥匙向小試管中加入少許醋酸銨晶體，振蕩使其溶解，因同離子效應(yīng)，氫離子濃度降低，酸性降低，橙紅色溶液顏色變?yōu)槌赛S色或黃色。

(3)在試管中加入3滴pbi2飽和溶液，加入2滴0.l mol·dm-3 ki溶液。有黃色沉淀碘化

鉛生成。

最新pb實驗心得體會實用五

流感病毒顆粒表面的血凝素（ha）蛋白，具有識別并吸附于紅細(xì)胞表面受體的結(jié)構(gòu)，ha試驗由此得名。ha蛋白的抗體與受體的特異性結(jié)合能夠干擾ha蛋白與紅細(xì)胞受體的結(jié)合從而出現(xiàn)抑制現(xiàn)象。

該試驗是目前who進(jìn)行全球流感監(jiān)測所普遍采用的試驗方法。可用于流感病毒分離株ha亞型的鑒定，也可用來檢測禽血清中是否有與抗原亞型一致的感染或免疫抗體。

只有當(dāng)抗原和抗體ha亞型相一致時才能出現(xiàn)hi現(xiàn)象，各亞型間無明顯交叉反應(yīng)；除雞血清以外，用雞紅細(xì)胞檢測哺乳動物和水禽的血清時需要除去存在于血清中的非特異凝集素；需要在每次試驗時進(jìn)行抗原標(biāo)準(zhǔn)化；需要正確判讀的技能。

1 ?阿氏（alsevers）液配制

稱量葡萄糖2.05g、檸檬酸鈉0.8g、檸檬酸0.055g、氯化鈉0.42g，加蒸餾水至100ml，散熱溶解后調(diào)ph值至6.1，

69kpa 15min高壓滅菌，4℃保存?zhèn)溆?。?.8%枸櫞酸鈉（3.8g枸櫞酸鈉，100ml超純水），101 kpa,20min高壓滅菌，4℃保存?zhèn)溆?保存期1個月）。

2 ?10%和1%雞紅細(xì)胞液的制備

2.1采血

用注射器吸取阿氏液約1ml（3.8%枸櫞酸鈉），取至少2只spf雞（如果沒有spf雞，可用常規(guī)試驗證明體內(nèi)無禽流感和新城疫抗體的雞），采血約2～4ml，與阿氏液混合（3.8%枸櫞酸鈉），放入裝10ml阿氏液（生理鹽水）的離心管中混勻。

2.2 洗滌雞紅細(xì)胞

將離心管中的血液經(jīng)1500～1800 r/min 離心8分鐘，棄上清液，沉淀物加入阿氏液（生理鹽水），輕輕混合，再經(jīng)1500～1800 r/min離心8分鐘，用吸管移去上清液及沉淀紅細(xì)胞上層的白細(xì)胞薄膜，再重復(fù)2次以上過程后，加入阿氏液20 ml（生理鹽水），輕輕混合成紅細(xì)胞懸液，4℃保存?zhèn)溆?，不超過5天。

2.3 ?10%雞紅細(xì)胞懸液

取阿氏液保存不超過5天的紅細(xì)胞，在錐形刻度離心管中離心1500～1800 r/min 8分鐘，棄去上清液，準(zhǔn)確觀察刻度離心管中紅細(xì)胞體積(ml)，加入9倍體積(ml)的生理鹽水，用吸管反復(fù)吹吸使生理鹽水與紅細(xì)胞混合均勻。（此步

可省略，直接配制1%紅細(xì)胞）

2.4 ?1%雞紅細(xì)胞液

取混合均勻的10%雞紅細(xì)胞懸液1 ml，加入9 ml生理鹽水，混合均勻即可。（根據(jù)檢測血清的數(shù)量，估算一下需要的1%雞紅細(xì)胞量，可按0.3ml/每份血清）

3 抗原血凝效價測定（ha試驗，微量法）

3.1 在微量反應(yīng)板的1孔～12孔均加入25μl pbs（生理鹽水），換滴頭。

3.2吸取25μl抗原加入第l孔，混勻。

3.3從第1孔吸取25μl，病毒液加入第2孔，混勻后吸取25μl加入第3孔，如此進(jìn)行倍比稀釋至第11孔，從第11孔吸取25μl棄之，換滴頭。

3.4每孔再加入25μl pbs（生理鹽水）。

3.5每孔均加入25μl 體積分?jǐn)?shù)為1%雞紅細(xì)胞懸液（將雞紅細(xì)胞懸液充分搖勻后加入）。

3.6振蕩混勻，在室溫（20～25℃）下靜置40min后觀察結(jié)果（如果環(huán)境溫度太高，可置4℃環(huán)境下反應(yīng)1小時）。對照孔紅細(xì)胞將呈明顯的鈕扣狀沉到孔底。

3.7結(jié)果判定 ?將板傾斜，觀察血凝板，判讀結(jié)果。

能使紅細(xì)胞完全凝集（100%凝集，++++）的抗原最高稀釋度為該抗原的血凝效價，此效價為1個血凝單位（hau）。注意對照孔應(yīng)呈現(xiàn)完全不凝集（-），否則此次檢驗無效。

4 血凝抑制（hi）試驗（微量法）

4.1 根據(jù)3的試驗結(jié)果配制4hau的病毒抗原。以完全血凝的病毒最高稀釋倍數(shù)作為終點，終點稀釋倍數(shù)除以4即為含4hau的抗原的稀釋倍數(shù)。例如，如果血凝的終點滴度為1:256，則4hau抗原的稀釋倍數(shù)應(yīng)是1:64（256除以4）。

4.2 在微量反應(yīng)板的1孔～11孔加入25μl pbs（生理鹽水），第12孔加入50μl pbs（生理鹽水）。

4.3 吸取25μl血清加入第1孔內(nèi)，充分混勻后吸25μl于第2孔，依次倍比稀釋至第10孔，從第10孔吸取25μl棄去。

4.4 1孔～11孔均加入含4hau抗原25μl，室溫（約20℃）靜置至少30min。

4.5 每孔加入25μl 1%的雞紅細(xì)胞懸液混勻，輕輕混勻，靜置約40min（室溫約20℃，若環(huán)境溫度太高可置4℃條件下進(jìn)行），對照紅細(xì)胞將呈現(xiàn)鈕扣狀沉于孔底。

4.6 結(jié)果判定

試驗成立的條件：只有陰性對照孔血清滴度不大于21og2，陽性對照孔血清誤差不超過1個滴度，試驗結(jié)果才有效。

以完全抑制4hau抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為hi滴度。

hi價小于或等于31og2判定hi試驗陰性；hi價大于或等于41og2為陽性。

1、合理選擇抗原和對照陽性血清。針對re-4和re-5株疫苗免疫采用相應(yīng)抗原和對照陽性血清。

同一亞型的禽流感病毒制成的抗原，如果毒株來源不同，則可能會存在抗原性差異，從而使檢測同一血清的結(jié)果有差別。一般來講，疫苗種毒株如果與抗原所用毒株相同時，則所測得的hi效價較高。

2、合理使用和保存抗原。反應(yīng)試劑要按規(guī)定保存和使用，凍干的試劑應(yīng)按照說明中規(guī)定的體積重新溶解并保存。要避免雜菌污染，因為污染所造成的非流感起源的凝集素也可與所有抗血清發(fā)生非特異反應(yīng)。為避免反復(fù)凍融和細(xì)菌污染，可以無菌操作將試劑分裝成小包裝。

3、反應(yīng)溫度不能太高。若在37℃ （如溫箱）下進(jìn)行，

最新pb實驗心得體會實用六

流感病毒顆粒表面的血凝素（ha）蛋白，具有識別并吸附于紅細(xì)胞表面受體的結(jié)構(gòu)，ha試驗由此得名。ha蛋白的抗體與受體的特異性結(jié)合能夠干擾ha蛋白與紅細(xì)胞受體的結(jié)合從而出現(xiàn)抑制現(xiàn)象。

該試驗是目前who進(jìn)行全球流感監(jiān)測所普遍采用的試驗方法?？捎糜诹鞲胁《痉蛛x株ha亞型的鑒定，也可用來檢測禽血清中是否有與抗原亞型一致的感染或免疫抗體。

只有當(dāng)抗原和抗體ha亞型相一致時才能出現(xiàn)hi現(xiàn)象，各亞型間無明顯交叉反應(yīng)；除雞血清以外，用雞紅細(xì)胞檢測哺乳動物和水禽的血清時需要除去存在于血清中的非特異凝集素；需要在每次試驗時進(jìn)行抗原標(biāo)準(zhǔn)化；需要正確判讀的技能。

1 ?阿氏（alsevers）液配制

稱量葡萄糖2.05g、檸檬酸鈉0.8g、檸檬酸0.055g、氯化鈉0.42g，加蒸餾水至100ml，散熱溶解后調(diào)ph值至6.1，

69kpa 15min高壓滅菌，4℃保存?zhèn)溆?。?.8%枸櫞酸鈉（3.8g枸櫞酸鈉，100ml超純水），101 kpa,20min高壓滅菌，4℃保存?zhèn)溆?保存期1個月）。

2 ?10%和1%雞紅細(xì)胞液的制備

2.1采血

用注射器吸取阿氏液約1ml（3.8%枸櫞酸鈉），取至少2只spf雞（如果沒有spf雞，可用常規(guī)試驗證明體內(nèi)無禽流感和新城疫抗體的雞），采血約2～4ml，與阿氏液混合（3.8%枸櫞酸鈉），放入裝10ml阿氏液（生理鹽水）的離心管中混勻。

2.2 洗滌雞紅細(xì)胞

將離心管中的血液經(jīng)1500～1800 r/min 離心8分鐘，棄上清液，沉淀物加入阿氏液（生理鹽水），輕輕混合，再經(jīng)1500～1800 r/min離心8分鐘，用吸管移去上清液及沉淀紅細(xì)胞上層的白細(xì)胞薄膜，再重復(fù)2次以上過程后，加入阿氏液20 ml（生理鹽水），輕輕混合成紅細(xì)胞懸液，4℃保存?zhèn)溆?，不超過5天。

2.3 ?10%雞紅細(xì)胞懸液

取阿氏液保存不超過5天的紅細(xì)胞，在錐形刻度離心管中離心1500～1800 r/min 8分鐘，棄去上清液，準(zhǔn)確觀察刻度離心管中紅細(xì)胞體積(ml)，加入9倍體積(ml)的生理鹽水，用吸管反復(fù)吹吸使生理鹽水與紅細(xì)胞混合均勻。（此步

可省略，直接配制1%紅細(xì)胞）

2.4 ?1%雞紅細(xì)胞液

取混合均勻的10%雞紅細(xì)胞懸液1 ml，加入9 ml生理鹽水，混合均勻即可。（根據(jù)檢測血清的數(shù)量，估算一下需要的1%雞紅細(xì)胞量，可按0.3ml/每份血清）

3 抗原血凝效價測定（ha試驗，微量法）

3.1 在微量反應(yīng)板的1孔～12孔均加入25μl pbs（生理鹽水），換滴頭。

3.2吸取25μl抗原加入第l孔，混勻。

3.3從第1孔吸取25μl，病毒液加入第2孔，混勻后吸取25μl加入第3孔，如此進(jìn)行倍比稀釋至第11孔，從第11孔吸取25μl棄之，換滴頭。

3.4每孔再加入25μl pbs（生理鹽水）。

3.5每孔均加入25μl 體積分?jǐn)?shù)為1%雞紅細(xì)胞懸液（將雞紅細(xì)胞懸液充分搖勻后加入）。

3.6振蕩混勻，在室溫（20～25℃）下靜置40min后觀察結(jié)果（如果環(huán)境溫度太高，可置4℃環(huán)境下反應(yīng)1小時）。對照孔紅細(xì)胞將呈明顯的鈕扣狀沉到孔底。

3.7結(jié)果判定 ?將板傾斜，觀察血凝板，判讀結(jié)果。

能使紅細(xì)胞完全凝集（100%凝集，++++）的抗原最高稀釋度為該抗原的血凝效價，此效價為1個血凝單位（hau）。注意對照孔應(yīng)呈現(xiàn)完全不凝集（-），否則此次檢驗無效。

4 血凝抑制（hi）試驗（微量法）

4.1 根據(jù)3的試驗結(jié)果配制4hau的病毒抗原。以完全血凝的病毒最高稀釋倍數(shù)作為終點，終點稀釋倍數(shù)除以4即為含4hau的抗原的稀釋倍數(shù)。例如，如果血凝的終點滴度為1:256，則4hau抗原的稀釋倍數(shù)應(yīng)是1:64（256除以4）。

4.2 在微量反應(yīng)板的1孔～11孔加入25μl pbs（生理鹽水），第12孔加入50μl pbs（生理鹽水）。

4.3 吸取25μl血清加入第1孔內(nèi)，充分混勻后吸25μl于第2孔，依次倍比稀釋至第10孔，從第10孔吸取25μl棄去。

4.4 1孔～11孔均加入含4hau抗原25μl，室溫（約20℃）靜置至少30min。

4.5 每孔加入25μl 1%的雞紅細(xì)胞懸液混勻，輕輕混勻，靜置約40min（室溫約20℃，若環(huán)境溫度太高可置4℃條件下進(jìn)行），對照紅細(xì)胞將呈現(xiàn)鈕扣狀沉于孔底。

4.6 結(jié)果判定

試驗成立的條件：只有陰性對照孔血清滴度不大于21og2，陽性對照孔血清誤差不超過1個滴度，試驗結(jié)果才有效。

以完全抑制4hau抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為hi滴度。

hi價小于或等于31og2判定hi試驗陰性；hi價大于或等于41og2為陽性。

1、合理選擇抗原和對照陽性血清。針對re-4和re-5株疫苗免疫采用相應(yīng)抗原和對照陽性血清。

同一亞型的禽流感病毒制成的抗原，如果毒株來源不同，則可能會存在抗原性差異，從而使檢測同一血清的結(jié)果有差別。一般來講，疫苗種毒株如果與抗原所用毒株相同時，則所測得的hi效價較高。

2、合理使用和保存抗原。反應(yīng)試劑要按規(guī)定保存和使用，凍干的試劑應(yīng)按照說明中規(guī)定的體積重新溶解并保存。要避免雜菌污染，因為污染所造成的非流感起源的凝集素也可與所有抗血清發(fā)生非特異反應(yīng)。為避免反復(fù)凍融和細(xì)菌污染，可以無菌操作將試劑分裝成小包裝。

3、反應(yīng)溫度不能太高。若在37℃ （如溫箱）下進(jìn)行，

最新pb實驗心得體會實用七

流感病毒顆粒表面的血凝素（ha）蛋白，具有識別并吸附于紅細(xì)胞表面受體的結(jié)構(gòu)，ha試驗由此得名。ha蛋白的抗體與受體的特異性結(jié)合能夠干擾ha蛋白與紅細(xì)胞受體的結(jié)合從而出現(xiàn)抑制現(xiàn)象。

該試驗是目前who進(jìn)行全球流感監(jiān)測所普遍采用的試驗方法?？捎糜诹鞲胁《痉蛛x株ha亞型的鑒定，也可用來檢測禽血清中是否有與抗原亞型一致的感染或免疫抗體。

只有當(dāng)抗原和抗體ha亞型相一致時才能出現(xiàn)hi現(xiàn)象，各亞型間無明顯交叉反應(yīng)；除雞血清以外，用雞紅細(xì)胞檢測哺乳動物和水禽的血清時需要除去存在于血清中的非特異凝集素；需要在每次試驗時進(jìn)行抗原標(biāo)準(zhǔn)化；需要正確判讀的技能。

1 ?阿氏（alsevers）液配制

稱量葡萄糖2.05g、檸檬酸鈉0.8g、檸檬酸0.055g、氯化鈉0.42g，加蒸餾水至100ml，散熱溶解后調(diào)ph值至6.1，

69kpa 15min高壓滅菌，4℃保存?zhèn)溆?。?.8%枸櫞酸鈉（3.8g枸櫞酸鈉，100ml超純水），101 kpa,20min高壓滅菌，4℃保存?zhèn)溆?保存期1個月）。

2 ?10%和1%雞紅細(xì)胞液的制備

2.1采血

用注射器吸取阿氏液約1ml（3.8%枸櫞酸鈉），取至少2只spf雞（如果沒有spf雞，可用常規(guī)試驗證明體內(nèi)無禽流感和新城疫抗體的雞），采血約2～4ml，與阿氏液混合（3.8%枸櫞酸鈉），放入裝10ml阿氏液（生理鹽水）的離心管中混勻。

2.2 洗滌雞紅細(xì)胞

將離心管中的血液經(jīng)1500～1800 r/min 離心8分鐘，棄上清液，沉淀物加入阿氏液（生理鹽水），輕輕混合，再經(jīng)1500～1800 r/min離心8分鐘，用吸管移去上清液及沉淀紅細(xì)胞上層的白細(xì)胞薄膜，再重復(fù)2次以上過程后，加入阿氏液20 ml（生理鹽水），輕輕混合成紅細(xì)胞懸液，4℃保存?zhèn)溆茫怀^5天。

2.3 ?10%雞紅細(xì)胞懸液

取阿氏液保存不超過5天的紅細(xì)胞，在錐形刻度離心管中離心1500～1800 r/min 8分鐘，棄去上清液，準(zhǔn)確觀察刻度離心管中紅細(xì)胞體積(ml)，加入9倍體積(ml)的生理鹽水，用吸管反復(fù)吹吸使生理鹽水與紅細(xì)胞混合均勻。（此步

可省略，直接配制1%紅細(xì)胞）

2.4 ?1%雞紅細(xì)胞液

取混合均勻的10%雞紅細(xì)胞懸液1 ml，加入9 ml生理鹽水，混合均勻即可。（根據(jù)檢測血清的數(shù)量，估算一下需要的1%雞紅細(xì)胞量，可按0.3ml/每份血清）

3 抗原血凝效價測定（ha試驗，微量法）

3.1 在微量反應(yīng)板的1孔～12孔均加入25μl pbs（生理鹽水），換滴頭。

3.2吸取25μl抗原加入第l孔，混勻。

3.3從第1孔吸取25μl，病毒液加入第2孔，混勻后吸取25μl加入第3孔，如此進(jìn)行倍比稀釋至第11孔，從第11孔吸取25μl棄之，換滴頭。

3.4每孔再加入25μl pbs（生理鹽水）。

3.5每孔均加入25μl 體積分?jǐn)?shù)為1%雞紅細(xì)胞懸液（將雞紅細(xì)胞懸液充分搖勻后加入）。

3.6振蕩混勻，在室溫（20～25℃）下靜置40min后觀察結(jié)果（如果環(huán)境溫度太高，可置4℃環(huán)境下反應(yīng)1小時）。對照孔紅細(xì)胞將呈明顯的鈕扣狀沉到孔底。

3.7結(jié)果判定 ?將板傾斜，觀察血凝板，判讀結(jié)果。

能使紅細(xì)胞完全凝集（100%凝集，++++）的抗原最高稀釋度為該抗原的血凝效價，此效價為1個血凝單位（hau）。注意對照孔應(yīng)呈現(xiàn)完全不凝集（-），否則此次檢驗無效。

4 血凝抑制（hi）試驗（微量法）

4.1 根據(jù)3的試驗結(jié)果配制4hau的病毒抗原。以完全血凝的病毒最高稀釋倍數(shù)作為終點，終點稀釋倍數(shù)除以4即為含4hau的抗原的稀釋倍數(shù)。例如，如果血凝的終點滴度為1:256，則4hau抗原的稀釋倍數(shù)應(yīng)是1:64（256除以4）。

4.2 在微量反應(yīng)板的1孔～11孔加入25μl pbs（生理鹽水），第12孔加入50μl pbs（生理鹽水）。

4.3 吸取25μl血清加入第1孔內(nèi)，充分混勻后吸25μl于第2孔，依次倍比稀釋至第10孔，從第10孔吸取25μl棄去。

4.4 1孔～11孔均加入含4hau抗原25μl，室溫（約20℃）靜置至少30min。

4.5 每孔加入25μl 1%的雞紅細(xì)胞懸液混勻，輕輕混勻，靜置約40min（室溫約20℃，若環(huán)境溫度太高可置4℃條件下進(jìn)行），對照紅細(xì)胞將呈現(xiàn)鈕扣狀沉于孔底。

4.6 結(jié)果判定

試驗成立的條件：只有陰性對照孔血清滴度不大于21og2，陽性對照孔血清誤差不超過1個滴度，試驗結(jié)果才有效。

以完全抑制4hau抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為hi滴度。

hi價小于或等于31og2判定hi試驗陰性；hi價大于或等于41og2為陽性。

1、合理選擇抗原和對照陽性血清。針對re-4和re-5株疫苗免疫采用相應(yīng)抗原和對照陽性血清。

同一亞型的禽流感病毒制成的抗原，如果毒株來源不同，則可能會存在抗原性差異，從而使檢測同一血清的結(jié)果有差別。一般來講，疫苗種毒株如果與抗原所用毒株相同時，則所測得的hi效價較高。

2、合理使用和保存抗原。反應(yīng)試劑要按規(guī)定保存和使用，凍干的試劑應(yīng)按照說明中規(guī)定的體積重新溶解并保存。要避免雜菌污染，因為污染所造成的非流感起源的凝集素也可與所有抗血清發(fā)生非特異反應(yīng)。為避免反復(fù)凍融和細(xì)菌污染，可以無菌操作將試劑分裝成小包裝。

3、反應(yīng)溫度不能太高。若在37℃ （如溫箱）下進(jìn)行，